PRÁCTICA 3 - Tinción de Giemsa
PRÁCTICA 3 - TINCIÓN DE GIEMSA
Objetivo: El objetivo de esta práctica es emplear este método para examinar frotis sanguíneos.
Fundamento: utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.
Es una tinción diferencial que permite distinguir estructuras celulares según se tiñan con colorante ácido, básico o la mezcla de ambos.
Materiales: papel de filtro, frasco lavador, portaobjetos, cristalizador, puente de tinción, vaso de precipitado para residuos, vaso de precipitado con agua de grifo/agua destilada, pipeta pasteur, tubos de ensayo, gradilla, papel parafilm, pipetas de vidrio graduadas (1 ml y 2 ml /5 ml), auxiliar de pipeteo, papel.
Instrumento: microscopio.
Reactivos: colorante Giemsa, metanol, solución tampón pH 7,2, aceite de inmersión y sangre capilar.
Procedimiento:
1. Preparar la zona de trabajo y rotular.
2. Realizar la extensión sanguínea y la dejamos secar.
3. Echamos agua en el cristalizador.
4. Una vez seca, la colocamos sobre el puente de tinción.
5. Cubrimos con metanol durante 3 min. Escurrimos y dejamos secar al aire.
6. Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de colorante Giemsa y 2 ml de solución tampón pH 7,2. Mezclamos con una pipeta pasteur y cubrimos el frotis dejando actuar durante 25 minutos.
7. Escurrir la extensión y lavar con agua del grifo.
8. Lavar con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Dejar escurrir y secar en posición vertical.
9. Observar la extensión al microscopio con el objetivo de 100X y aceite de inmersión. Interpretar los resultados.
10. Recoger la zona de trabajo y limpiar.
Resultados: puedo observar un monocito con un núcleo de color violáceo intenso, un neutrófilo polimorfonucleado de color violeta azulado y, además, gran cantidad de eritrocitos de color rosáceo.
ACTIVIDADES DE REFUERZO
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