PRÁCTICA 4 - Tinción de Wright

                                                PRÁCTICA 4 - TINCIÓN DE WRIGHT

Objetivo: facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre.

Fundamento: este colorante está basado en el uso de una mezcla formada por un colorante ácido (eosina) y un colorante básico (azul de metileno). Estos colorantes actúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos.

Materiales: cristalizador, puente de tinción, pipetas pasteur, frasco lavador, portaobjetos, gradilla, 

Instrumento: microscopio.

Reactivos: azul de metileno, solución tampón pH 7,2 y aceite de inmersión

Muestra: Sangre anticoagulada.

Procedimiento: 

1. Preparamos todo el material que vamos a utilizar y la zona de trabajo.

2. Realizar el frotis y dejar secar al aire.

3. Una vez seco, colocar el frotis sobre el puente de tinción y cubrir el porta con 1mL de eosina-azul de metileno. Dejar actuar durante 1 minuto.

4. Lavar con solución tampón pH 7,2. Dejar escurrir y secar al aire en posición vertical.

5. Inmediatamente antes de su empleo y en un tubo de ensayo diluir 0,5 mL de eosina-azul de metileno con 0,5 mL  de solución tampón pH 7,2. Mezclar con una pipeta pasteur y cubrir la extensión con esta dilución.

6. Teñir durante 3-5 minutos y lavar con agua del grifo. Volver a lavar con solución tampón pH 7,2. Dejar escurrir y secar en posición vertical.

7. Observar al microscopio depositando una gota de aceite de inmersión en el centro del cubre y usando el objetivo de 100X. 

8. Interpretar los resultados y limpiar el material y la zona de trabajo.

Resultados: he podido observar gran cantidad de eritrocitos de color rosado y algún que otro neutrófilo de color púrpura.

ACTIVIDADES DE REFUERZO

1.- ¿Qué tipo de colorante usamos en esta tinción?

Es un colorante neutro. Son sales coloreadas de un ácido y una base. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro.

2.- ¿Qué sustancia empleamos como fijador?

No necesita fijador, ya que el colorante lleva metanol en su composición.

3.- ¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?

De 3 a 5 minutos.