PRÁCTICA  11 -  RECUENTO DE LEUCOCITOS                      03/02/2022 

Objetivo: realizar el conteo de leucocitos para ver si es alto o bajo.

Fundamento: El recuento de leucocitos (WBC) consiste en la determinación del número de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre (generalmente en 1 mm).

Este es un recuento manual, primero la visualización de una cámara de recuento en vacío.

Materiales: papel de filtro, rotulador, vaso de precipitado, gradilla, tubos de ensayo, cámara de Neubauer, frasco lavador, micropipeta, puntas de pipeta, pipeta automática.

Muestra: sangre capilar obtenida con lanceta o sangre venosa anticoagulada con EDTA.

Reactivos: líquido de Turck, ácido acético, solución acuosa de violeta de genciana y agua destilada.

Procedimiento:

1. Poner un cubre sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión a esta, se ejerce una ligera presión al tiempo que se desliza el cubre sobre las bandas laterales, previamente humedecidas con H,O, de su porción central.

2. Pipetear 100 microL de sangre y mezclar en el tubo de ensayo con 1900 microL de liquido de Turck para obtener una dilución 1/20 (la más habitual) o con 900 microL para obtener una dilución 1/10.

3. Depositar una gota de la dilución entre la cámara y el cubre, colocando la punta de la pipeta con 50 microL de dilución en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejar que el líquido penetre por capilaridad en el espacio existente entre ambas estructuras. Hay que evitar que se formen burbujas.

4. Colocar la pipeta en posición casi vertical, situar la punta de la pipeta en el borde apropiado, se deja salir algo del líquido y se retira justo antes de que se llene completamente el espacio comprendido entre el cubre y la cámara.

5. Dejar reposar unos minutos la sangre diluida en la cámara, para que las células sedimenten.

6. Enfocar con el objetivo de 40x y el condensador a baja altura; y verificar que la distribución de los leucocitos es homogénea.

7. Contar los leucocitos de los 4 cuadrados grandes de las esquinas del retículo (cada uno se divide a su vez en 16 cuadrados medianos).

Resultados

Se cuentan los leucocitos de 4 cuadrados grandes. Hay que dividir por 4 la cifra obtenida en el recuento para calcular el número de leucocitos que hay en un cuadrado grande.

La longitud de cada uno de los lados de los cuadrados grandes es de 1 mm y la longitud del espacio comprendido entre estos y el cubre es de O,1 mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar el número de leucocitos existentes, no en O,1 mm, sino en 1 mm3.

La sangre previamente al recuento se diluye:

- Multiplicar el resultado anterior por 10, si se ha partido de la sangre entera diluida a 1/10.

- Por 20, si se ha partido de la sangre entera diluida a 1/20.

WBC = L x 20 x D

WBC = recuento de leucocitos (número de leucocitos por mm de sangre).

L= leucocitos contados en 4 cuadrados grandes

D= factor de dilución (10 o 20).